Clickchemistrytools貨號1037產品DBCO Magnetic Beads操作說明

一、產品基礎信息

• 貨號：1037?1（1 mL），1037?5（5      mL）

• 濃度：10 mg/mL，粒徑 0.8–1 μm，DBCO 基團密度≥30 nmol/mg

• 反應原理：無銅點擊化學（SPAAC），DBCO 特異性與疊氮（?N?）標記蛋白 / 分子共價偶聯

• 用途：捕獲富集疊氮修飾蛋白、免疫沉淀、細胞分選、蛋白互作、神經 / 巨噬細胞相關蛋白純化

• 儲存：2–8 ℃，嚴禁凍存，使用前顛倒充分重懸

二、推薦緩沖液（通用）

• 結合 / 洗滌緩沖液：PBS（pH 7.2–7.4），可加 0.01% Tween?20、1% BSA 降低非特異結合

• 禁止：高濃度尿素、強還原劑、含游離疊氮離子體系

三、標準操作步驟（捕獲疊氮標記蛋白）

1. 磁珠預處理（關鍵）

1.1取所需體積磁珠（常規 20–50 μL，200–500 μg），摩爾比為磁珠與疊氮分子（如1:1至5:1）

磁力架上靜置 1–2 min，棄上清

1.2加入等量 PBS 洗滌，吹打重懸，磁分離棄上清，重復 2 次

1.3用結合緩沖液重懸磁珠備用

2. 結合反應（無銅、溫和條件）

2.1加入疊氮標記的蛋白 / 細胞裂解液樣本

2.2室溫旋轉孵育1–2 h；或 4 ℃旋轉過夜，效率更高

2.3磁分離，棄未結合上清

3.洗滌去除雜蛋白

3.1PBS?T（含 0.01% Tween?20）洗滌3 次，每次充分重懸→磁分離棄上清，去除非特異吸附

4. 目標分子洗脫 / 下游應用

4.1蛋白 WB / 質譜：加 SDS 上樣緩沖液，95 ℃煮沸 5–10 min，磁分離取上清

4.2保留磁珠?蛋白復合物：直接用于后續共沉淀、互作檢測

四、關鍵注意事項

• 全程禁止銅離子，否則破壞無銅點擊反應

• 磁珠易聚集，每次使用前充分顛倒重懸，禁止劇烈高速離心

• 樣本 pH 維持 6–8，避免強酸強堿

• 洗滌充分，降低背景，適配低豐度蛋白檢測